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Laboratorio di Biochimica e Biologia Molecolare degli Sfingolipidi  

Lab. Colombo

 

Linee di ricerca

Da tempo scopo delle ricerche svolte nel nostro laboratorio è lo studio del profilo quali- e quantitativo, delle correlazioni struttura-funzione e del metabolismo di lipidi complessi, in particolare fosfolipidi e sfingo(glico)lipidi, in modelli animali e cellulari in condizioni sia fisiologiche sia patologiche. Attualmente tali ricerche sono rivolte allo studio di:

- alterazioni della struttura e del metabolismo di fosfolipidi e sfingo(glico)lipidi indotte da Plasmodium falciparum e/o suoi prodotti metabolici in tessuti da modelli murini (fegato e polmoni) e cellule in coltura (eritrociti, cellule endoteliali e cheratinociti);

- alterazioni del metabolismo biosintetico e catabolico di sfingo(glico)lipidi durante il differenziamento e/o trasformazione neoplastica in cellule in coltura (cellule mammarie e cheratinociti);

- aspetti biochimici e molecolari delle glicosiltransferasi, con particolare interesse per la GM3 sintasi umana (clonaggio ed espressione del gene, cinetica enzimatica, proprietà biochimiche e localizzazione cellulare);

- ruolo degli sfingo(glico)lipidi nelle vie di segnale attivate dai recettori della famiglia Erb e dai recettori per gli estrogeni in cellule mammarie normali (cellule HC11 e MCF-7) e tumorali (cellule MDA-MB 231).

 

Tecniche

  • estrazione, purificazione e analisi dei componenti lipidici cellulari mediante tecniche cromatografiche (HP-TLC, gas-cromatografia e HPLC)
  • isolamento e caratterizzazione biochimica di proteine mediante tecniche elettroforetiche (SDS-PAGE) e immunologiche (western blot, ELISA, immunoprecipitazione) e saggi enzimatici
  • purificazione, analisi e manipolazione di DNA plasmidico e batteriofagico, e di RNA
  • clonaggio ed espressione (transiente e stabile) di geni in cellule eucariotiche e procariotiche
  • analisi dell’organizzazione strutturale di geni mediante primer extension ed S1 mapping e delle regioni regolatorie mediante geni reporter
  • analisi dell'espressione genica mediante Northern blot, RT-PCR e RNase Protection Assay
  • analisi delle interazioni DNA-proteina mediante EMSA e delle interazioni proteina-proteina mediante co-immunoprecipitazioni

 

Selezione pubblicazioni

1. F. Omodeo-Salè, L. Cortelezzi, Z. Vommaro, D. Scaccabarozzi, AM Dondorp. “Dysregulation of L-arginine metabolism and bioavailability associated to free plasma heme.” Am J Physiol Cell Physiol. (2010) 299, 148–154.

2. S. Milani, E. Sottocornola, S. Zava, M. Galbiati, B. Berra, I. Colombo. "Gangliosides influence EGFR/ErbB2 heterodimer stability but they do not modify EGF-dependent ErbB2 phosphorylation." Biochim Biophys Acta (2010) 1801, 617-624.

3. S. Zava, S. Milani, E. Sottocornola, B. Berra, I. Colombo. "Two active and differently N-glycosylated isoforms of human ST3Gal V are produced from the placental mRNA variant by leaky scanning mechanism." FEBS Lett (2010) 584, 1476-1480.

4. N. Basilico, L. Cortelezzi, C. Serpellini, D. Taramelli, F. Omodeo-Salè. “Two complementary fluorimetric assays for the determination of aminoquinoline binding and uptake by human erythrocytes in vitro.” Anal Biochem (2009) 385, 371-373.

5. F. Omodeo-Salè, L. Cortelezzi, N. Basilico, M. Casagrande, A. Sparatore, D. Taramelli. “Novel antimalarial aminoquinolines: heme binding and effects on normal or Plasmodium falciparum-parasitized human erythrocytes.” Antimicrob Agents Chemother (2009) 53, 4339-4344.

6. S. Milani, E. Sottocornola, S. Zava, P. Berselli, B. Berra, I. Colombo. "Ganglioside GM3 is stably associated to tyrosine phosphorylated ErbB2/EGFR receptor complexes and EGFR monomers, but not to ErbB2." Biochim Biophys Acta (2007) 1771, 873-878.

7. F. Omodeo Salè, L. Cortelezzi, E. Riva, E. Vanzulli, D. Taramelli. “Modulation of glyceraldehyde 3 phosphate dehydrogenase activity and tyr-phosphorylation of Band 3 in human erythrocytes treated with ferriprotoporphyrin IX.” Biochem Pharmacol (2007) 74, 1383-1389.

8. E. Sottocornola, R. Misasi, V. Mattei, L. Ciarlo, R. Gradini, T. Garofano, B. Berra, I. Colombo and M. Sorice. "Role of gangliosides in the association of ErbB2 with lipid rafts in mammary epithelial HC11 cells." FEBS J. (2006) 273, 1821-1830.

9. P. Berselli, S. Zava, E. Sottocornola, S. Milani, B. Berra, I. Colombo. "Human GM3 synthase: a new mRNA variant encodes an NH2-terminal extended form of the protein." Biochim Biophys Acta (2006) 1759, 348-358.

10. F. Omodeo Salè, E. Vanzulli, G. Montorfano, D. Monti. “Major artefacts encountered in studying biological samples containing ferriprotoporphyrin IX.” Anal Biochem (2005) 339, 257-261.

 

Brevetti

1. S. Ronchi, A. Bartorelli, B. Berra, I. Colombo. "Proteins from mammalian liver and their use in oncology." (WO 96/02567) 01.02.1996.

2. A. Bartorelli, B. Berra, I. Colombo, S. Ronchi. "Nucleotide sequence from goat liver." (WO 97/30154) 21.08.1997.

3. V. Naktinis, D. Concas Benevelli, B. Berra, I. Colombo, S. Ronchi, A. Bartorelli, V. A. Bumelis. "Recombinant protein and its use in therapy and diagnostics." (WO 00/63368) 26.10.2000. 

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