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Laboratorio di Virologia Molecolare  

Linee di ricerca
 
Costruzione di vaccini ricombinanti per la prevenzione e terapia di malattie infettive, anche causate da virus utilizzati a scopo bioterroristico.

Breve descrizione schematica delle varie linee di ricerca
Il nostro programma di ricerca consiste nella preparazione di nuovi ricombinanti a scopo vaccinale, sia a DNA che virali, basati sul background genetico degli avipoxvirus. Attualmente, ci occupiamo della costruzione di vaccini ricombinanti esprimenti i geni gag/pol ed env di HIV-1 per la prevenzione/terapia dell’AIDS e degli oncogeni E6/E7 di HPV-16 contro i tumori correlati all’infezione da papillomi umani. Tali vaccini vengono poi valutati per l’espressione, l’innocuità, l’immunogenicità e l’efficacia in adeguati modelli animali. Nell’ambito del controllo della diffusione di agenti infettivi a scopo bioterroristico e per un nuovo vaccino contro il vaiolo, ci occupiamo inoltre della preparazione e sviluppo di ricombinanti genetici e virali, esprimenti transgeni contro ortopoxvirus. Gli aspetti più importanti della nostra ricerca consistono nell’uso di vettori virali sicuri, incapaci di replicare in cellule di mammifero, ma esprimenti transgeni ad alto livello e in grado di indurre una risposta immune completa. L’utilizzo di protocolli prime-boost, in cui vaccini genetici vengono usati in combinazione con fowlpox e proteine ricombinanti, può inoltre aumentarne l’immunogenicità.

 

Tecniche

Nel nostro laboratorio vengono utilizzate tecniche di:

immunologia: ELISA, Western Blot, immunoprecitazione, immunofluorescenza
biologia cellulare: colture di cellule in linea continua, preparazione di cellule primarie, immortalizzazione di cellule primarie con SV40
biologia molecolare: PCR, RT-PCR, real-time PCR, clonaggio e amplificazione di geni sia virali che cellulari
microbiologia: preparazione di batteri competenti, trasformazione batterica, antibiogramma, saggi di sensibilità a composti antibatterici, amplificazione plasmidica
virologia: coltivazione e titolazione di virus a DNA e RNA, ricombinazione in vitro, purificazione virale su gradiente e da placca, saggi di neutralizzazione virale in vitro
microscopia elettronica: preparazione ed analisi di campioni biologici per l’analisi e identificazione ultrastrutturale di virus e cellule

 

Selezione pubblicazioni

1. Radaelli A (2007) Prime boost immunization with DNA, recombinant fowlpox virus and VLPSHIV elicit both neutralizing antibodies and IFNg producing T cells against the HIV envelope protein in mice that control env bearing tumour cells. Vaccine 25:2128-2138.

2. Pozzi E (2009) MHC-restricted CTL assay: an improved method based on naïve and SV40-immortalized rabbit epidermal target cells. J. Virol. Methods 155:77-81.

3. Pozzi E (2009) Construction and characterization of recombinant fowlpox viruses expressing human papilloma virus E6 and E7 oncoproteins. J. Virol. Methods 158: 184-189.

4. Pacchioni S Canarypox and fowlpox viruses as recombinant vaccine vectors: an ultrastructural comparative analysis. Arch. Virol. 155: 915-924.

5. Radaelli A (2010) Fowlpox virus recombinants expressing HPV-16 E6 and E7 oncogenes for the therapy of cervical carcinoma elicit humoral and cell-mediated responses in rabbits. J. Transl. Medicine 8: 40-51.

6. Zanotto C (2010) Canarypox and fowlpox viruses as recombinant vaccine vectors: a biological and immunological comparison. Antiviral Res. 88:53-63.

7. Zanotto C (2011) Construction and characterisation of a recombinant fowlpox virus that expresses the human papilloma virus L1 protein. J. Transl. Medicine 9: 190-200.

8. Radaelli A. (2012) A prime/boost strategy by DNA/fowlpox recombinants expressing a mutant E7 protein for the immunotherapy of HPV-associated cancers. Virus Res. 170: 44-52.

9. Bissa M (2013) GFP co-expression reduces the A33R gene expression driven by a fowlpox vector in replication permissive and non-permissive cell lines. J. Virol. Methods 187: 172-176.

10. Pacchioni S (2013) L1R, A27L, A33R, and B5R vaccinia virus genes expressed by fowlpox recombinants as putative novel orthopoxvirus vaccines. J. Transl. Medicine 11: 95-104

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